FITC标记菊粉
化学名称: Inulin(3’,6’dihydroxy-3-oxospiro(isobenzofuran-1(3H) ,9’-[9H] xanthen]-5 (or 6)yl) carbamothioate
Fluorescein isothiocyanate- Inulin
Fluoresceinyl thiocarbamoyl- Inulin
Fluorescein isothiocyanate- Inulin
Fluoresceinyl thiocarbamoyl- Inulin
菊糖是一种低分子量的聚果糖，人和动物肠道外给药时具有良好的耐受性。它被肾小球完全过滤，不被肾小管分泌或再吸收，因此被认为是测量肾小球滤过率（GFR）的金标准。
不同来源的菊糖纯化组分，分子量约为3000至5000。
结构
FITC标记菊粉是由异硫*酸荧光素（FITC）与来源于大丽花块茎的菊粉合成而成，方法如de Belder和Granath（1）所述。产品为黄色粉末，易溶于水或盐溶液，形成黄色的溶液。稀溶液（1-2%）透明澄清，而浓溶液在静置后会析出菊粉的结晶，结晶在加热条件下可以重新溶解。温度升至80°C，保持溶液近中性。该品也可溶于DMSO, 甲酰胺和其它极性有机溶剂，但不溶于短链脂肪醇，丙酮，氯仿，二甲基甲酰胺。
所有批次的分子量、取代度、干燥失重和游离FITC都要检查。TdB提供分子量为4kDa的FITC标记菊粉。
荧光素部分通过稳定的硫代氨甲酰键连接，并且标记过程不会致菊糖解聚。FITC标记菊粉中，每单位果糖含有0.001-0.008 摩尔 FITC。低取代度下，电荷的影响很小。
图1 FITC标记菊粉分子结构示意图
光谱数据
FITC标记菊粉的最大激发波长490 nm，最大发射波长 520nm(见 Fig.2)。荧光强度与pH相关。pH3-9时，FITC标记菊粉溶液的荧光相关性见图3.。 在生物介质中的测量可能会显著地影响荧光强度，荧光强度因此得到增强或削弱。
Fig. 2 pH9.0的0.025M硼酸缓冲液（13.5 mg溶于50ml缓冲液）中FITC标记菊粉的荧光吸收图谱。最大激发波长490 nm，最大发射波长 520nm。
图3 FITC标记菊粉的荧光相关性
物理化学性质
FITC标记菊粉的平均重均分子量是由SEC检测确定的（Superose 6+ 12; 葡聚糖标准品校准），大约是5000。三个批次的检测结果分别为：5440, 5165, 5640。 使用Dionex树脂分离得到菊粉，甚至可获得分散度高至30的组分。缺点是该方法并不定量(2)。Phelps 使用检测渗透压来确定重均分子量，数值是5640 (3) 。
当使用光散射法时，得到的重均分子量的数据是7250。值得注意的是，低分子量下，光散射法得到的数据不那么可靠。
Marchessault和同事研究了菊糖晶体的结构，他们提出了五倍螺旋结构（4）。后来André和同事利用电子衍射技术对菊糖单晶进行了研究，发现了两个反向平行的六重螺旋结构（5）。
储存和稳定性
FITC标记菊粉在密封容器室温下可以保存6年以上。
室温下密封保存，FITC标记菊粉可以稳定超过6年。稳定性与FITC标记葡聚糖类似。
只有在较高的pH（>9）和温度下，硫氨酰键才有水解的危险。和聚蔗糖一样，由于呋喃果糖单元对酸水解的敏感性，其在酸性pH下的稳定性较差。
毒性
菊粉经口或静脉测试无中毒症状。
应用
菊粉长期以来一直用于监测肾清除率。 FITC标记菊粉提供了一种简便灵敏的实时分析方法，以替代繁琐的化学分析。
生物学方面及其应用
FITC菊粉主要用于研究实验动物肾小球滤过率（GFR），也用于研究影响其它组织透过性的因素。
荧光测量分别提供了健康和疾病组织的传输和渗透性的定量数据。此类研究可以通过活体荧光显微镜实时进行。该技术具有高灵敏度，在组织液中可检测到低至1微克/毫升的浓度。
肾小球膜透过性的研究
在大鼠股静脉注射FITC菊粉后，测定大鼠肾小管液与血浆浓度的比值（6）。通过比较51Cr-EDTA和[H3]-菊糖，确定了该方法作为肾小球滤过率测量的有效性。Fleck在1999年（7）对FITC菊粉用于GFR研究进行了全面的调查。大鼠经尾静脉或颈静脉以每小时4ml/100g体重的速率给药4mg/mL。
Dunn和同事发现小鼠肌酐清除率（通过两种方法）和FITC菊粉清除率（8）之间存在良好的相关性。用FITC菊粉测定小鼠GFR的两种方法已见诸报道（9）。
Lorenz和Gruenstein描述了一种简单、非放射性方法，使用FITC菊粉（10）评估单个肾小球滤过率。FITC标记菊粉用于测定小鼠肾小管的液体吸收（11）。用FITC菊粉（12）研究了雄性和雌性经饮食诱导的2型糖尿病小鼠的肾功能和葡萄糖输送。用FITC菊粉灌流法研究了单个近端小管和负鼠肾细胞（KO）。在（14-15）中，有很多KO细胞研究中，FITC菊粉作为液相内标和FITC标记白蛋白作为受体介导的内标。测定了肾上皮细胞Ca+开关前后FITC标记菊粉的输送率变化（16）。最近，FITC标记菊粉用于评估生物人工肾装置的屏障功能（17，18）。
其他细胞透过性研究
FITC菊粉对肠上皮细胞单层透过性的研究（19）已见诸报道。Neunlist和同事使用FITC标记菊粉和FITC标记葡聚糖研究肠上皮细胞单层的透过性（20）。照射后2～24小时，用FITC标记菊粉（21）通过免疫荧光显微镜观察结肠上皮紧密连接（TJ）、贴壁连接（AJ）和肌动蛋白细胞骨架的完整性。FITC标记菊粉在肝脏和肠道组织破坏的研究中也很有价值（22）。
葡聚糖和FITC标记葡聚糖具有牛顿流体特征，例如粘度与剪切速率无关（图4）。在pH4-10范围的研究显示，粘度与pH无关。 在pH8-9和6.5-9.5下，经电泳，FITC标记菊粉的等电点未发生迁移(1)。
产品列表
参考文献
1. A.N.de Belder and K.Granath. Preparation and properties of fluorescein-labelled dextrans. Carbohydr Res.1973;30:375-378.
2. C.Fleck. Determination of the glomerular filtration rate (GFR); Methodological problems, age-dependen- ce, consequences of various surgical interventions, and the influence of different drugs and toxic sub- stances. Physiol Res.1999; 48:267-279.
3. C.F.Phelps. The physical properties of inulin solu- tions. Biochem J. 1965;95:41-47.
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5. I.André, K.Mazeau, I.Tvaroska et al. Molecular and crystal structures of inulin from electron diffractional data. Macromolecules. 1996;29:4626-4635.
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