一、实验背景

      感冒？鼻炎？是不是真的会分不清楚~而且，你周围有鼻炎的小伙伴吗？小编弱弱的想了一下，周围就有俩鼻炎小伙伴！鼻炎也分种类的哦~过敏性鼻炎为变态反应性鼻炎的一种，是常见病、多发病。针灸治疗过敏性鼻炎的报道首见于1957年，随着相关研究的发展，针灸治疗本病的平均有效率为95%左右。So 还是我们中医疗法厉害，哈哈~

二、实验目标

1.利用外泌体小RNA测序，分析针灸治疗过敏性鼻炎小鼠模型（人）后外泌体microRNAs的表达变化；

2.研究针灸治疗过敏性鼻炎的分子基础和内在机制。

三、实验分组

实验材料和分组

（1）以过敏性鼻炎小鼠模型为研究对象

分组：a:普通用药组

b:过敏性鼻炎小鼠治疗空白对照组

c:针灸治疗组

（2）以过敏性鼻炎病人为材料研究对象

分组：a: 针灸治疗前（自身空白对照组）

b: 针灸治疗组（针灸治疗有效组）

c: 普通用药组

d: 针灸无效组 （指标：症状改善、趋化因子）

四、实验处理

（1）以过敏性鼻炎小鼠模型为研究对象：

① 选取同窝出生的小鼠，经相同的饲养条件，选取18只体重，健康状况无明显差异的小鼠，用同样的方法对小鼠 进行过敏性鼻炎造模；

② 对造模成功的小鼠随机分成三组：一组采用针灸治疗过敏性鼻炎；一组采用西替利嗪片＋布地奈德鼻喷剂配合治疗；另外一组则作为空白对照组；

③ 在针灸和药物组治疗有显著疗效后，处死小鼠取血清样本；

（2） 两种不同研究对象的实验设计注释：

① 外泌体测序需要约 5 ml 的全血，对小鼠而言，取血量5 ml即使不至死也对小鼠的免疫系统造成非常大的影响，所以在小鼠实验中用空白对照组代替治疗之前的组。而对人而言，取血5ml对免疫系统无显著影响，故可在治疗之前全部采集一次外周血，形成治疗之前/治疗之后的比较组。

② 针灸治疗的有效率约为95% ，针灸治疗组可选取治疗有效的人，故针灸治疗组和针灸有效组为同一组。

五、实验分析

1.分析比较miRNA 差异表达方案

小鼠实验：

① 针灸治疗组 vs 空白对照组：分析过敏性鼻炎小鼠经针灸治疗与未经治疗的外泌体miRNA 的差异，找出针灸治疗引起的显著差异表达外泌体miRNAs。

② 普通用药组 vs 空白对照组：找药物疗引起的显著差异表达外泌体miRNAs

③ 取以上两个比较组显著差异表达的miRNAs 交集，找到针灸治疗和药物治疗共同改变的miRNAs，进一步研究治疗的分子基础。

④ 取①相对②显著差异的miRNAs，进一步研究针灸治疗相对于药物治疗独立的分子通路。

过敏性鼻炎病人实验：

分析思路与小鼠相同。

增加针灸无效组和针灸有效组差异miRNAs分析。

2.显著差异miRNAs 表达量验证

高通量测序分析得到的差异表达miRNAs 需要qRT-PCR验证。

3.miRNAs 功能研究实验

①运用化学方法合成的miRNA模拟物，能模拟细胞中成熟miRNA的高水平表达，以增强内源性miRNA的调控作用，进行细胞功能获得性(gain-of-function)研究.

②运用化学方法合成的miRNA抑制剂，可通过与成熟miRNA分子特异性结合而削弱细胞中内源性miRNA导致的基因调控作用，进行miRNA功能缺失性(loss-of-function)研究。

六、重要生信分析介绍——GO富集性柱状图

Gene Ontology（GO）分析可以对每一个基因进行功能注释。一方面通过富集的GO注释条目，可以整体性地把握基因差异表达谱对应的潜在功能，从而找到不样本差异表达miRNAs与哪些细胞功能。

图 GO 分析靶基因

今天的外泌体研究方案分析就到这里了，你有什么好想法吗？有没有受到一点启发呢？

有想了解这方面的小伙伴，可以联系小编哦~坐等你的到来！