百萤-Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒绿色荧光光谱及实验方案-分析方法-资讯-生物在线

百萤-Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒绿色荧光光谱及实验方案

作者:西安百萤生物科技有限公司 2023-06-13T00:00 (访问量:3152)

 DN**段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可以通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测。 适用于荧光酶标仪,荧光显微镜或流式细胞仪。在流行的FITC通道上可以轻松检测到其信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒。

光谱:

适用仪器

流式细胞仪

Ex:488 nm

Em:530/30  nm 

通道:FITC通道

 荧光显微镜

Ex:FITC 滤波片组

Em:FITC 滤波片组

推荐孔板:黑色透明底板 

荧光酶标仪

Ex:490 nm

Em:520 nm

Cutoff:510 nm

推荐孔板:黑色透明底板

读取模式:底读模式

实验方案

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物准备细胞。

2. TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。

3. 洗涤细胞。

4. 4%甲醛(可选)固定细胞。

5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm(截止= 515 nm)处的荧光强度。

溶液配制 

工作溶液配制

0.5μL的100X Tunnelyte Green(组分A)添加到50μL的反应缓冲液(组分B)中,使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意:应单独评估每个细胞系,以确定细胞密度。

实验步骤

1.根据您的特定协议,将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞,我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔,对于非贴壁细胞,建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时,在每种标记条件下,用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意:我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时,以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色:

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液,并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液(组分B)。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm(cut off= 515 nm)的荧光酶标仪,带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选:从步骤5中移出反应缓冲液,并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次,并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm(cut off= 515 nm)的荧光酶标仪,带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选:用1X Hoechst(组分C)在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核,以进行图像分析

产品相关图片

所示。在海拉细胞TUNEL反应的荧光图像100海里的治疗或1μM staurosporine (SS) 4小时与未经处理的控制。与TUNEL细胞孵化工作解决方案1小时在37ºC。分析了绿色荧光信号使用荧光显微镜和FITC过滤设置。荧光标记DNA链断裂显示强烈的荧光染色法在SS细胞治疗。

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