您是否有这样的困惑？

老是重复不出文献里的细胞实验数据！

是否有这种不太喜欢的经历？

细胞实验结果总是不达预期？

甚至连自己也无法重复曾经做过的细胞实验结果！

面对这些问题，您是否怀疑过您用的细胞或者文献里用的细胞不是真的该细胞！

不是真的该细胞！

据统计，现在有大约30%的细胞系污染有别的细胞，或者被错误辨识（就是本来是A细胞，却被当着B细胞在使用）。被污染或错误辨识的细胞导致结果不可重复，或者结论错误。由此导致浪费了自己大量的时间，金钱，甚至被同行看轻......

包括Nature、Science等著名杂志，以及ATCC、NIH等机构都呼吁科研人员对细胞进行鉴定。现在，越来越多的杂志在投稿时要求撰稿人提供细胞STR分析数据。

STR（Short tandem repeats，短串联重复序列），顾名思义，指短的（核心序列一般是2-6个碱基），连成串的，重复序列。分布广泛（广泛分布于人和哺乳动物基因组，约占人类基因组序列的3%），串联的碱基重复次数不同而具有高度的多态性。

如：CACACACA、AATGAATGAATG等

现在，STR已被ATCC等机构作为细胞鉴定的金标准。

STR分型分为四步：

一、DNA提取

可用市面上商业化的DNA提取试剂盒进行。总的原则是：提取的DNA纯度要高，无蛋白、RNA、脂类、糖类等污染；提取的DNA完整，片段要长，无降解。

二、PCR扩增

这一步，要用PCR技术对目的片段进行扩增。这里常采用多重荧光PCR进行。一种细胞在一个基因位点上与别的细胞相似的几率较大，但同时在几个至几十个位点相似的几率就极小。因此，这里会对多个位点进行扩增，常常采用多重PCR进行。

普通PCR一般采用1对引物扩增1个目的片段，这里要对多个位点进行扩增，就需要设计多对引物。并且要注意引物扩增片段的长短，引物之间不能有相互作用，各对引物的退火温度要趋于一致。如果采用荧光标记，一般将荧光染料标记在目标序列其中一条引物的5’端，并且产物长度相同的片段的引物要标记不同颜色荧光。一般目的片段长度相差10bp以上的可以标记相同的荧光。为了避免荧光干扰，所用荧光染料的发射波长也要相差越大越好。

三、电泳

电泳可以采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，再银染。现在，多重荧光PCR后常采用毛细管电泳进行。

毛细管电泳具有效率高，自动化程度高，易于分析等优点。其由电源、荧光光源、检测器、进样装置、电泳装置、电脑等构成。

这里一般采用毛细管凝胶电泳，当多重荧光PCR产物通过进样端进入到毛细管中后，变性的DNA在电泳中，DNA片段从小到大，依次通过位于正极的检测器。在这里，荧光染料受到激发，发出的光按强度被记录下来。根据各片段通过的时间和荧光强度和颜色制成图谱。

四、数据分析

将未知细胞的图谱与以同样方式等到的确定的基因Ladder相比较，从而得到未知样品的分型。

在STR分型图谱中，一个基因位点上为单峰，表示是纯合子；双峰表示杂合子；如果出现3个及以上的峰，表示有交叉污染或是有多倍体。峰越高表示该片段含量越多。在同一个位点上，出现在前面的峰，其片段长度短于后出现的峰。

拓普生物采用除包括ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点外，还增加了12个位点 ，共检测21个STR位点。

STR分型图谱示例：

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