通用型DNA纯化回收试剂盒说明书

Universal DNA Purification Kit

目录号：  YJ0519

保   存：  室温

组分说明

                                         Cat.No.                   YJ0519

                                          KitSize                     50

                                         BufferPC                   50ml

                                         BufferPS                   15ml

                                BufferPW（concentrate）                10ml

                                         BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDM                   50

                                CollectionTube（2ml）                 50

产品简介

   本试剂盒采用新型硅基质膜及特殊的缓冲液系统，高效专一的结合 DNA，既能从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段，又能直接纯化 PCR  产物与酶反应物中的单链、双链 DNA，可最大限度地去除引物、酶、矿物油、琼脂糖等杂质，获得高纯度的DNA，满足多种实验要求。本试剂盒可回收 50bp-50kb 的 DNA 片段，每个吸附柱最高可吸附 20 μg 的 DNA，且 DNA回收效率高达 90%。由本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于酶切、连接、PCR 扩增、DNA 测序等各种分子生物学实验。

注意事项

1.  第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在BufferPW中加入无水乙醇。

2.  使用前请检查BufferPC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

3.  电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

4.  切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

5.  回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关。

6.  所有离心步骤均在室温下进行。

自备试剂：无水乙醇，离心管  

操作步骤

1． 样品处理

   A 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段

   a1. 将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余凝胶部分），放入干净的离心管（自备）中，称取凝胶重量。 

        注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。

   a2. 向胶块中加入3倍凝胶体积的Buffer PC；当琼脂糖凝胶浓度>2%时，建议使用6倍凝胶体积的  Buffer PC（如凝胶重为100mg，其体积可视为100μl，依此类推）。

   a3.50℃孵育10分钟，其间不断温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解。

       注意：1）在胶充分溶解后检测pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30μl 的3M醋酸钠（pH5.0）将pH值调到5-7

             2）吸附柱的容积是 700μl，若样品体积大于 700μl 可分批加入。

             3）胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合 DNA 的能力较弱。

   a4.（可选步骤）当回收片段<500bp或>4kb时，应加入1倍胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀（如凝胶为100mg，则加入100μl异丙醇）。

       注意：当回收片段为500bp-4kb时，加入异丙醇不会影响回收率。

   B 从PCR反应液或酶反应液中回收DNA

   b1．计算PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入5倍PCR反应液或酶反应液体积的 Buffer PC，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。

    例如：100 μl的PCR样本中加入500μlBufferPC（不包括石蜡油或矿物油）。

2． 柱平衡: 将吸附柱（SpinColumnDM）放入收集管（CollectionTube）中，向吸附柱中加入200 μl Buffer PS，12,000 rpm（~13,400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

3． 将从a3或b1中所得溶液加入到平衡好的吸附柱（已装入收集管）中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

    注意：吸附柱容积为700μl，若样品体积大于700μl 可分批加入。

4． 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

    注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入BufferPW静置2-5分钟再离心。

5． 将吸附柱放回收集管中，12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

     注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

6.  将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置加入30-50 μl Buffer EB（pH8.5）或水（pH7.0-8.5），室温放置2分钟。12,000rpm离心2分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

    注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。

          2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤6。

          3）洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。

          4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

          5）回收大于10kb的DNA片段时，BufferEB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

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