人 IL-10(高灵敏) Elisa Kit

背景介绍：

白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子,调节细胞的生长与分化,参与炎性反应和免疫反应,是目前公认的炎症与免疫抑制因子。在肿瘤、感染、器官移植、造血系统及心血管系统中发挥重要作用,与血液、消化、尤其是心血管系统疾病密切相关。在1989年，Mosmannand及他们的同事描述了一种新的免疫介质，由Th2细胞克隆分泌，能够抑制Th1细胞克隆IL-2和IFN-γ的合成。早期被命名为细胞因子合成抑制因子(CSIF)，这种因子后来被命名为IL-10，在这被发现的21年期间，很多研究深入剖析了这个细胞因子的生物学特性，人类IL-10基因位于1号染色体上，包括总共5.1kb的序列包含5个外显子，IL-10基因的启动子中有很多的SNP位点，一些证据表明这些基因多态性在体外会影响IL-10的表达，IL-10基因由178个氨基酸组成蛋白质，分泌时会被切去18个氨基酸的信号肽，人类和鼠类的IL-10约有75%的氨基酸序列是一致的。

检测原理：

Solarbio (Solarbio ®) ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗人IL-10单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的人IL-10会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗人IL-10抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的人IL-10发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的人IL-10，则HRP会使无色TMB变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的人IL-10浓度与OD成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人IL-10的浓度。

原理图：
 

注意事项：

1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。

2. 试剂盒未使用时应保存在2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。

3. 试剂盒使用前请在室温恢复30min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。

5. 为避免交叉污染，请在试验中使用1次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，

使用前请离心处理（5-10 S即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。

7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的

  试剂代替本试剂盒中的某单个组分。

8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。

安全提示：

试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时，请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

试剂盒组成及储存：

自备实验器材（不提供，可代购）

1． 酶标仪（主波长450nm，参考波长630nm）

2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3． 洗板机或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5． 双蒸水，去离子水，量筒等

6． 稀释用聚丙烯试管

样本收集及储存：

1. 细胞培养上清：

将细胞培养基移至无菌离心管，在4℃条件下1000 ×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），避免反复冻融。

2. 血清样本：

室温血液自然凝固20 min后，在4℃条件下1000×g离心10 min，然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。

3. 血浆样本：

将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合20 min，在4℃条件下1000×g离心10 min，然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），避免反复冻融。

※注意：血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。

试剂准备：

1. 试剂回温：首先在实验前30 min将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入37℃ 温浴直到结晶全部溶解。

2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将20倍浓缩洗涤液稀释成1倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml至冻干标准品中，静置15分钟待其完全溶解后轻轻混匀(浓度为2000pg/ml)，然后按照以下浓度：40(20ul复溶好的标准品原液+980ul标准品稀释液）、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0pg/ml进行稀释，40pg/ml为标准曲线最高点浓度，标准品/样本稀释液（SR1）作为标准曲线的零点（0pg/ml）。复溶过的标准品原液（2000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并