DNA转染试剂说明书
DNAFect Transfection Reagent
目录号：YJ0860
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组分说明
Catalogno. YJ0860 YJ0860A
KitSize 0.5 ml 1 ml
DNAFect Transfection Reagent 0.5 ml 1 ml
产品简介
DNAFect是一种高效的阳离子脂质体转染试剂，适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率，并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染，基因表达和基因功能研究。
注意事项
1.转染试剂使用前应先震荡摇匀。
2.转染效率与细胞密度有很大关系，不同实验间应保持一个基本的传代步骤，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。
一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80-90%，悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×10 5细胞/ml，用于转染的最佳细胞密度
3. 转应染根据不同的时不要在培细养胞基中加入抗生素，否类型或用途而异。则会导致细胞死亡。
操作步骤
对于大部分的细胞系， DNA与DNAfect的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
1. 贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500 μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105 个细悬浮细胞：在胞，待细胞转细染之前，在胞长至80-90%24孔板的满时进每行孔中加入转染。500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×10 5个细胞。
2. 转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：
a. 取适量DNA，加入25 μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNAfect，加入25 μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNAfect混合（使DNA以及DNAfectin的终总体积为50 μl），轻轻混合均匀，并在室温下孵育20分钟（溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率）
注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3. 将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450 μl无血清培养基，然后将步骤2中50 μl转染复合物加入到24细胞孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。
4. 将细胞置于含5%CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500 μl生长培养基。
5. 18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6. 对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注：(1) 该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNAfect用量见附表，
该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
(2) 转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNAfect具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议更换生长培养基。
(3) 优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。
附表 293T细胞转染参考数据
每孔 铺板用 DNA（μg）和稀释体 DNAFect转染试剂（μl）和稀
培养板
表面积 培养基体积 积（μl） 释体积（μl）
96孔 0.3cm2 200 μl 0.13 μg至10 μl 0.5 μl至10
μl
24孔 2cm2 500 μl 0.8 μg至25 μl 2 μl 至25
μl
12孔 4cm2 1ml 1.6 μg至50 μl
4 μl至50 μl
35mm 10cm2 2ml 4.0 μg至100 μl 10 μl至100 μl
6孔 10cm2 2ml 4.0 μg至100 μl 10 μl至100 μl
60mm 20cm2 5ml 8.0 μg至500 μl 20 μl至500 μl
10cm 60cm2 10ml 24 μg至800ml 60 μl至800 μl