反转录是将RNA转录成互补DNA (cDNA) 的过程，该反应由反转录酶介导完成。在有退火引物的情况下，反转录酶首先与 RNA 模板结合。反转酶的RNA依赖性 DNA 聚合酶活性通过掺入反应混合物中的dNTP来合成cDNA，反应生成得到 cDNA:RNA 杂合链，此过程被称为第一链 cDNA 合成。
莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反转录酶是分子生物学实验流程中常见的反转录酶之一。为了获得更高的反转录效率、更好的热稳定性和更高的 cDNA 合成率，通常会对原始的反转录酶进行基因工程改造。目前市面上的反转录试剂所需要的反转录时间普遍从15分钟到30分钟不等，时间相对较长，当反应样本量较大时，整体花费时间量也会急剧上升。翌圣生物现有的5分钟反转录系列产品，在5分钟内即可完成反转录，省时高效。
精品推荐一
5分钟一步消化&反转录预混液(Cat #11151ES)
产品特点
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一步完成：一步完成gDNA去除和反转录；
·
快速反应：消化&反转仅需5分钟；
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高效合成：可保证100 pg RNA反转录；
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产物稳定：cDNA产物可长久稳定保存；
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性能展示
反转录产量高
图. 以人293T细胞RNA为模板，分别检测三种基因。品牌A、品牌B、品牌C均为一步gDNA去除&反转录试剂。测试结果显示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反转录的产量均优于其他品牌，Ct值更小。
图. 以拟南芥RNA为模板，品牌A、品牌B、品牌C均为一步gDNA去除&反转录试剂。测试结果显示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反转录的产量均优于其他品牌，Ct值更小。
优异的灵敏度
图. 以人293T细胞RNA为模板，扩增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分别投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA进行反转录并进行荧光定量检测。结果显示，11151ES可满足100 pg-1 μg RNA的反转录。
cDNA产物稳定性好
图.以人293T细胞RNA为模板进行反转录，将获得的cDNA产物进行反复冻融，分别冻融10次、20次、30次。测试结果显示11151ES反转录得到的cDNA产物在30次反复冻融处理后，仍保持高度的稳定性，Ct值差异不大。
图. 以人293T细胞RNA为模板进行反转录，将获得的cDNA产物在-20℃、4℃、25℃和37℃的温度条件下放置7天。测试结果显示11151ES反转录得到的cDNA产物在不同温度下存储7天，仍保持高度的稳定性，Ct值差异不大。
客户用户体验
样本来源：人肝脏组织总RNA
样本来源：胃黏膜细胞RNA
样本来源：小鼠胰岛素瘤细胞RNA
精品推荐二
产品特点
·
快速反转：最快5分钟左右即可完成第一链cDNA合成；
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检出率高：10 pg-1 ug的RNA检出率；
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高效合成：合成效率媲美进口，最长可合成14kb大小的片段；
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适用广泛：可用于下游PCR或qPCR；
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示踪便利：示踪版包含无干扰、可视化蓝色示踪染料，提醒加样进度。
·
性能展示
快速反转录
|
反转录时间 |
平均Ct值 |
|
5 min |
21.693 |
|
10 min |
21.589 |
|
15 min |
21.604 |
|
20 min |
21.746 |
|
25 min |
21.756 |
|
30 min |
21.691 |
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES进行反转录，得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，不同反转录时间处理的Ct值差值在0.2之内。说明产品可在5分钟内完成反转录，反转效果和长时间反转效果持平。
灵敏度高，最低可至10 pg
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES进行反转录，得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，RNA 投入量为10 pg-1 μg时，11149ES均可反转成功，保证定量结果。
扩增性能好，最长扩增14 kb片段
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES进行反转录，将得到的cDNA进行PCR检测。结果显示，11149ES能够满足合成1 kb-14 kb长度的cDNA, 后续PCR有一定的适用场景。若需要直接反转出10kb以上的片段，建议延长反转录时间至20-30分钟，以保证最终片段的获取。
反转录效率比对
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RNA投入量 |
Ct值 |
|
|
11149ES |
进口A品牌 |
|
|
1 μg |
15.2 |
15.5 |
|
100 ng |
18.0 |
18.5 |
|
10 ng |
21 |
21.7 |
|
1 ng |
24.5 |
25.1 |
|
100 pg |
29.1 |
29.7 |
|
10 pg |
32.7 |
34.3 |
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES、进口A品牌进行反转录，其中11149ES不进行gDNA去除步骤，将得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，进口A品牌反转时间为13分钟， 11149ES反转时间为5分钟，不同产物定量显示，11149ES的Ct更小或者接近进口竞品，说明11149ES 5分钟反转效率优于或近似进口A品牌的反转录效率。
|
RNA投入量 |
Ct值 |
|
|
11149ES |
进口B品牌 |
|
|
1 μg |
16.2 |
17.4 |
|
100 ng |
19.0 |
20.5 |
|
10 ng |
22 |
23.8 |
|
1 ng |
26 |
27.9 |
|
100 pg |
31.4 |
33.2 |
|
10 pg |
32.9 |
35.6 |
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES、进口B品牌进行逆转录，其中11149ES不进行gDNA去除步骤，得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，进口B品牌反转时间为20分钟，11149ES反转时间为5分钟，不同量底物定量显示，11149ES的Ct更小或者接近进口B品牌，说明11149ES 5分钟反转效率优于或近似进口B品牌的反转录效率。
客户体验反馈
样本来源：菊花叶片
客户评价：与某进口品牌效果相似，扩增常规大小的片段效果不错。
样本来源：果*叶片
客户评价：蓝色很好看。
样本来源：水稻
客户评价：与其他反转录试剂盒相比，节省加样时间，节省反转录反应时间（其他试剂盒需要15+2 min，本试剂盒只需5 min），后续基因克隆DNA电泳结果证明，本试剂盒反转效率更高，条带更亮，所以会更节省PCR使用试剂，节省成本。
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方法 |
分类 |
产品名称 |
货号 |
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RNA提取 |
同Trizol提取 |
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent |
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免氯仿升级版 |
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent(Tcm Free) |
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动物组织/细胞总RNA提取，避开有毒试剂，最快15 min完成 |
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit细胞/组织总RNA提取试剂盒 |
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qPCR染料法 |
高灵敏通用型定量预混液(染料法) |
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Master Mix |
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超高性价比定量预混液 (染料法)，已发文章累计IF达到5000+ |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox) |
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) |
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反转录试剂 |
5 分钟一步消化&反转录预混液 |
Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR |
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5 分钟快速反转，最长可满足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游应用PCR/qPCR)-示踪版 |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit |
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5 分钟快速反转，最长可满足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游应用PCR/qPCR)-常规版 |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit（No Dye） |
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高质量第一链cDNA合成预混液，含gDNA去除(下游应用qPCR) |
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |