流感候选化合物体外药效评价
细胞水平实验，也称为体外实验，是在实验室中使用细胞培养技术进行的实验，旨在研究候选化合物对细胞的作用及其机制。这些实验通常是抗病毒药物开发过程中最早期的步骤，用于快速筛选出有效化合物并评估其潜力和安全性。
1. 细胞毒性测试
· 目的：评估候选药物对细胞的毒性，确定其安全剂量范围。
· 方法：使用各种细胞系（如癌细胞、正常细胞等）进行培养，加入不同浓度的候选药物，通过检测细胞存活率来评估毒性。常用的方法包括MTT/MTS测试、LDH释放测定和流式细胞术。
· 结果：确定半数毒性浓度（CC50）或半数抑制浓度（IC50）。CC50是指在体外试验中50%的宿主细胞被破坏时的药物浓度。这个值越高，说明药物的毒性越低。IC50是指在体外试验中当50%的病毒被抑制时的药物浓度。这个值越低，说明药物的有效性越高。
2. 药物效力评估
· 目的：测定候选药物在体外对目标细胞或病原体的抑制效果。
· 方法：在培养的目标细胞中加入不同浓度的候选药物，通过检测细胞增殖、病原体复制或生物标志物水平来评估药物效力。常用的方法包括细胞增殖测试（如BrdU、EdU掺入）、病原体复制测定（如病毒载量检测）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。
· 结果：计算IC50值、SI（Selective Index）值或其他效力指标，以确定药物在体外的有效浓度。
3. 作用机制研究
· 目的：了解候选药物如何在细胞水平发挥作用，包括其分子靶点和信号通路。
· 方法：
o 基因表达分析：通过RT-qPCR、RNA测序等技术，检测药物处理后细胞中基因表达的变化。
o 蛋白质水平分析：通过Western blot、ELISA或质谱分析，检测药物对细胞蛋白质表达和修饰的影响。
o 细胞信号通路研究：使用报告基因实验、荧光共振能量转移（FRET）等技术，研究药物对细胞内信号通路的影响。
o 细胞功能实验：通过细胞迁移、侵袭、凋亡和细胞周期分析，研究药物对细胞功能的影响。
4. 药代动力学（PK）和药效学（PD）研究
· 目的：评估候选药物在细胞水平的吸收、分布、代谢和排泄特性。
· 方法：
o 细胞吸收实验：通过药物浓度梯度和时间梯度实验，研究药物在细胞中的吸收速率和饱和点。
o 细胞分布实验：使用荧光标记、放射性同位素或质谱分析，研究药物在细胞内的分布情况。
o 细胞代谢实验：通过质谱分析检测药物及其代谢产物，研究药物在细胞内的代谢途径。
o 细胞排泄实验：研究药物和代谢产物从细胞中的排泄速率和机制。
通过细胞水平实验，研究人员可以初步筛选出具有潜力的候选药物，了解其安全性、有效性和作用机制。这些数据为后续的动物实验和临床试验提供重要的科学依据，是药物开发过程中至关重要的步骤。
迪福润丝生物流感体外药效评价
· 服务内容
迪福润丝生物技术优势
迪福润丝生物拥有强大的病毒反向遗传技术平台，可以用来研究病毒的感染机制、传播路径、宿主反应等。通过病毒反向遗传技术，我们可构建荧光报告病毒（fluorescent reporter virus）用于抗流感的候选化合物的临床前药物筛选。
· 荧光报告病毒是一种经过基因工程改造的病毒，其基因组中插入了编码荧光蛋白的基因。荧光蛋白（如GFP、RFP、YFP等）在被感染的细胞中表达，使研究人员可以通过荧光显微镜或其他荧光检测设备直接观察病毒感染和复制的过程。荧光报告病毒是一种强大的工具，广泛用于病毒学、细胞生物学、免疫学等领域的研究。
· 定点突变技术是一种用于研究病毒基因功能和病毒-宿主相互作用的分子生物学技术。通过引入特定的核苷酸序列改变，科学家可以研究这些变化如何影响病毒的行为、致病性和对药物的敏感性。可研究病毒对抗病毒药物的敏感性，通过引入突变模拟药物抗性，进行耐药病毒验证，帮助开发更有效的治疗策略。
· 病毒细胞水平抑制实验案例
迪福润丝生物通过细胞水平实验验证某候选药物的IC50，验证该药物的有效性
· 随机突变病毒库技术
迪福润丝生物拥有构建耐药株和预测耐药位点的先进技术——随机突变病毒库技术。这项技术的核心是通过引入随机突变来生成大规模的病毒变异库，然后利用筛选或测序等方法来识别具有耐药性的突变体。通过随机突变病毒库技术，我们能够生成大量的病毒变异体，从而有效地研究耐药性的发生机制，并为抗病毒药物的开发提供重要的参考和指导。
· Minigenome RNP
通过聚合酶活性检测，我们可以在实验室中重建流感病毒的基因复制和转录过程，从而评估流感病毒聚合酶的活性和功能。在抗病毒药物的筛选中发挥重要作用，研究人员可以利用这项技术评估不同抗病毒药物对流感病毒聚合酶活性的影响，从而为药物研发提供重要参考。
· 复制缺陷病毒/假病毒技术
在研究高致病性禽流感病毒时，由于其高度致病性和传播性，直接使用完整的病毒进行实验可能存在安全风险，因此使用DIIVPs成为一种替代方法。迪福研发通过成熟反向遗传平台，通过缺失病毒致病基因构建缺陷型病毒，使得病毒在感染宿主细胞后无法完全复制，从而减轻了实验操作中的风险。DIIVPs为研究高致病性禽流感病毒提供了一种安全有效的研究工具，可以用于评估疫苗和抗病毒药物在细胞水平的有效性，为科学家在普通环境下进行流感病毒相关研究提供了可能。
迪福润丝生物毒株资源优势
结合迪福润丝生物自身积累的大量抗流感病毒研究案例、历年流行毒株、及WHO推荐毒株，迪福润丝生物拥有完整且全面的流感毒株资源库（见下表）。