实验材料
小鼠肝脏组织
实验方法
RNA提取：RNApure高纯总RNA提取试剂盒（BioTeke），操作步骤参照说明书。目的基因：小鼠管家基因β–actin.。
cDNA制备：测定小鼠肝脏总RNA浓度，而后使用Super RT Kit（BioTeke） 制备20μl cDNA。操作参照试剂盒说明书。
二步法荧光定量PCR：
BioTeke 2×SYBR real-time PCR premixture Kit. 20μl反应体系：
2×SYBR premixture 10μl
RNA Free Water 8.2μl
Primer F 0.4μl
Primer R 0.4μl
cDNA 1μl
ABI Power SYBR Green PCR Master Mix Kit 20μl反应体系：
2×SYBR premixture 10μl
RNA Free Water 8.2μl
Primer F 0.4μl
Primer R 0.4μl
cDNA 1μl
TOYOBO Realtime PCR Master Mix(SYBR Green) Kit 20μl反应体系：
2×SYBR premixture 10μl
RNA Free Water 8.2μl
Primer F 0.4μl
Primer R 0.4μl
cDNA 1μl
备注：每份试剂均做三管重复。
反应程序：
95℃ 10min
95℃ 15sec
61℃ 31sec
40个循环
实验结果
小鼠肝脏组织RNA反转录成cDNA后分别用BioTeke公司试剂、ABI公司试剂和TOYOBO公司试剂同时进行两步法荧光定量PCR扩增结果如图1。
图1a：小鼠肝脏组织各公司扩增曲线
图1b：小鼠肝脏组织公司试剂熔解曲线
从三家公司试剂的扩增曲线（图1a）可看出，在相同反应情况下BioTeke公司试剂的Ct值最小，TOYOBO公司的Ct值次之，ABI公司试剂的Ct值最大；另外，不同试剂的荧光信号值，BioTeke公司的最高，TOYOBO公司与ABI公司的大致相当，从这些结果可以说明，BioTeke 2×SYBR real-time PCR premixture Kit具有较高的扩增效率。
从熔解曲线（图1b）可以看出，ABI公司试剂和TOYOBO公司试剂与BioTeke公司相比熔解曲线峰值较低，也同样反应出扩增效率高低的问题。另外两家公司试剂的熔解曲线峰值重复性较差，反应特异性不好，建议引物重新设计。
实验结论
经过实验对比可看出BioTeke公司的2×SYBR real-time PCR premixture Kit是三家公司中扩增效率最高、特异性最好的，并且比ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix具有更高的扩增效率，更好的特异性。说明，BioTeke公司的试剂质量绝不亚于国际知名公司的产品