产品信息

产品描述

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®是针对Illumina^®高通量测序平台专业开发设计的建库试剂盒。本试剂盒可将低至1 ng的微量片段化DNA制备成适用于Illumina^®测序平台的专用文库。与常规分步法建库相比，Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®整合了多个酶反应步骤，提供简并的、线性化的操作方案，显著提高DNA建库效率。Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®使用精心优化的配方体系，适用于各类DNA样本的建库。本试剂盒中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存，有效期1年。

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打或轻轻振荡混匀，剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的枪头，吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；使用专用的移液器等设备；并定时对各实验区域进行清洁（使用0.5%次**钠或10%漂白剂进行擦拭清理），以保证实验环境的洁净度。

二、关于DNA片段化

1. 本试剂盒中兼容机械法及酶切法片段化的DNA。

2. 本试剂盒兼容范围为1 ng-1 μg Input DNA。应尽可能使用A₂₆₀/A₂₈₀ = 1.8-2.0的高质量Input DNA。表1中列举了将本试剂盒应用于常见应用中推荐的Input DNA量。

表1 常见应用中推荐Input DNA量

【注】：上表为使用高质量DNA时推荐的Input DNA量，当Input DNA质量较差或需要进行片段分选时，应适当上调使用量。

3. Input DNA特指投入末端修复/dA尾添加步骤中的DNA。

4. Input DNA制备过程中带入的高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响末端修复/dA尾添加步骤反应效率，建议DNA片段化后进行磁珠纯化或分选。当使用机械法进行DNA片段化且产物不进行纯化或长度分选而直接建库时，请将DNA稀释在TE Buffer中进行片段化，请勿在灭菌超纯水中进行。当使用酶切法进行片段化且产物不进行纯化或长度分选而直接建库时，请确认Stop Buffer中不包含过量的金属离子螯合剂。如条件不满足，可先将片段化产物纯化或长度分选后溶于0.1×TE Buffer或灭菌超纯水中（≤50 μL），再进行文库构建。

三、关于接头连接（Adapter Ligation）

1. Yeasen提供以下Indexed Adapters，适用于Illumina^®高通量测序平台文库构建：

Cat#12611，Hieff NGS^TM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina^®, Set 1；

Cat#12612，Hieff NGS^TM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina^®, Set 2；

Cat#12614，Hieff NGS^TM Dual-Indexed Adapter Kit for Illumina^®；

2. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。应选用优质的、正规厂家来源的Adapter。推荐Adapter与Input DNA摩尔比在10:1-200:1之间。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表2 1 ng-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

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