盐酸博莱霉素
产品信息
产品名称
产品编号
规格
储存
价格（元）
盐酸博莱霉素
60216ES60
100 mg
-20℃避光保存
453.00
盐酸博莱霉素
60216ES80
10×100 mg
-20℃避光保存
3353.00
产品描述
盐酸博来霉素是博来霉素/腐草霉素抗生素家族的一个成员，是从Streptomyces verticillus中分离的水溶性、铜离子螯合糖蛋白抗生素，铜离子存在使得溶液呈蓝色。这种铜离子螯合形式是没有活性的，当抗生素进入细胞后，Cu2+被还原成Cu+，并被细胞中的巯基化合物除去。此时，盐酸博来霉素才被活化并与DNA结合，对DNA进行切割，从而引起细胞死亡。而盐酸博来霉素耐受基因（Sh ble）编码的蛋白质可以与盐酸博来霉素结合，并抑制盐酸博来霉素切割DNA。盐酸博来霉素作用谱非常广，其对细菌，真菌（包括酵母菌）、植物和哺乳动物细胞都有很强的抗菌活性，因此盐酸博来霉素常用作一种非常有效的工具抗生素，用来筛选携带Sh ble抗性基因并能稳定表达分子量为13.665 kDa的一种盐酸博来霉素抗性蛋白的细胞株。
本产品为溶于高纯度水的无菌溶液形式，浓度为100 mg/mL，细胞培养级。
产品性质
CAS号（CAS NO.）
11006-33-0
分子式（Formula）
C55H85O21N20S2Cu - HCl
分子量（Molecular weight）
1535
纯度（Purity）
>90% by HPLC
结构式（Structure）
 
运输与保存方法
冰袋运输。产品-20℃避光保存。避免反复冻存，有效期1年。
注意事项
1. 本品具有一定的光敏感型，操作与培养过程尽量暗处进行。产品保存尽量避光。
2. 本品有毒害，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
应用浓度
1. 大肠杆菌（E. coli）：25-50 µg/mL，用低盐LB培养基筛选（NaCl浓度不能超过5 g/L)。
2. 酵母菌：50-300 µg/mL，用YPD或基本培养基（minimal medium）筛选。
3. 哺乳动物细胞：50-1000 µg/mL，根据细胞选择合适的培养基。
操作步骤（哺乳动物细胞筛选）
【注意事项】
1. 盐酸博来霉素用于筛选哺乳动物稳定转染细胞的浓度范围为50-1000 µg/mL，平均工作浓度范围为250-400 µg/mL。影响筛选浓度的主要因素包括离子强度，细胞类型，细胞密度以及生长速率。以下步骤仅作参考，请根据自身实验体系做适当调整。
2. 盐酸博来霉素的杀灭机制不同于新生霉素（neomycin）和潮霉素（hygromycin），细胞不会聚集成团或从培养板表面脱落。一旦接触到盐酸博来霉素，敏感细胞会出现如下的形态变化：1）细胞体积明显增加（类似于巨细胞病毒感染容纳性细胞引起的肿大效应）；2）异常的细胞形状包括细胞长臂（long appendages）出现；3）胞浆内出现大型空泡（源于内质网、高尔基体或支撑蛋白的破裂）；4）质膜和核膜破裂，导致膜上出现许多孔。这些敏感细胞最终会完全破损，仅以细胞碎片的形式存在。
3. 盐酸博来霉素抗性细胞继续正常生长，长成不同于敏感细胞的克隆。形态上，其与未接触盐酸博来霉素的正常细胞没有差异。
一、建立杀灭曲线
1. 重新铺板或者将满盘细胞重新分盘，使得细胞密度约25%，按照8个平板/组准备，培养24 h。
2. 去除旧培养基。加入含不同浓度盐酸博来霉素的筛选用培养基，盐酸博来霉素浓度可设置为0，50，100，200，400，600，800和1000 μg/mL，每个浓度做3个平行；也可根据自身实验体系，设置不同的浓度梯度。
3. 每3-4天更换新鲜的筛选培养基，并观察存活细胞的比例。选择在合适的时间（1-2周内）杀死大多数细胞的浓度为最佳工作浓度。
【注】：若是难以在显微观察下区分活细胞，也可用台盼蓝染色来计算存活细胞的数量，以确定盐酸博来霉素的最适浓度。